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填饲鹅肝脏组织中SCD5、SREBP1和ELOVL6基因甲基化的研究
来源: |  日期:2017-4-19 |  阅读:1838

       本研究通过分析脂类代谢相关基因SCD5、SREBP1、ELOVL6在填饲后鹅肥肝中的甲基化水平,验证填饲后脂类代谢基因甲基化水平发生变化,并调控基因的表达水平,从而影响鹅肥肝中脂肪细胞的合成及分化,进一步研究朗德鹅肝脏脂肪沉淀的机制,为选育鹅肥肝高产高质系提供重要的分子遗传学依据,也为人类肥胖症、脂肪肝等代谢疾病的研究提供参考。
       选取70日龄朗德鹅25只(公母各半)经强制填饲玉米等日粮28天(包含预饲期7天)为填饲组,同一批70日龄朗德鹅25只(公母各半)采取常规日粮饲喂为对照组。试验结束后,从每组中随机各抽取5只采集肝脏组织并提前总DNA,设计引物调取该区域附近的基因组片段,确保目的区域序列的准确性。根具查找到的参考序列,进行CpG岛分析,查找出有效的CpG岛区域并分析基因位点启动子序列甲基化位岛,亚硫酸盐处理DNA及洗涤甲基化后的DNA,再经PCR扩增,Pyrosequencing检测分析每个位点甲基化状态,进行单因素方差分析和多重比较,最后对SCD5、SREBP1、ELOVL6基因mRNA表达量进行荧光定量验证分析,并将其结果与焦磷酸测序结果进行整合分析。
       结果显示:填饲组SCD5基因两个片段的甲基化水平分别为64.98±14.29%,79.17±10.42%,对照组SCD5基因两个片段的甲基化水平分别为73.46±4.89%,81.39±7.34%;填饲组SREBP1基因两个片段的甲基化水平分别为45.31±1.64%,21.18±2.51%,对照组SREBP1基因两个片段的甲基化水平分别为52.46±8.96%,28.52±7.19%;填饲组ELOVL6基因两个片段的甲基化水平分别为65.92±3.77%,69.94±6.89%,对照组ELOVL6基因两个片段的甲基化水平分别为66.05±2.12%,70.37±4.94%;填饲组与对照组的SCD5-1S片段甲基化差异显著(P<0.05),SCD5-2S片段甲基化差异不显著(P>0.05),SREBP1-1S片段甲基化差异显著(P<0.05),SREBP1-2S片段甲基化差异极显著(P<0.01),ELOVL6-1S片段甲基化差异不显著(P>0.05),ELOLV6-2S片段甲基化差异不显著(P>0.05)。填饲组SCD5基因和ELOVL6基因的mRNA表达量均高于对照组,差异不显著(P>0.05),而SREBP1基因在填饲组的mRNA表达量极显著低于对照组(P<0.01)。综合各项指标:填饲引起SCD5、SREBP1、ELOVL6基因甲基化水平降低,SCD5、ELOVL6基因mRNA表达量上升,SREBP1基因的mRNA表达量降低,提示SCD5和ELOVL6的甲基化修饰对mRNA的表达起反向调控的作用。

 

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