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[原创]脂肪酸、胰岛素及葡萄糖对鹅肝细胞中脂肪酸沉积及HMGCS1基因表达的影响
来源: |  日期:2017-4-19 |  阅读:1685

       鹅肥肝是世界三大美食之一,填饲是获得鹅肥肝的重要技术手段。经过填饲后,鹅肝中含有大量对人体健康有益的不饱和脂肪酸、卵磷脂、微量元素等,具有较高的经济价值。以往的研究多关注于肝脏脂肪酸的研究,而关于胆固醇方面的文献报道甚少,也没有关于填饲对鹅肝脏胆固醇含量影响的报道。3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因(HMGCS1)基因参与调控HMG-CoA合成酶的生成,该酶是肝脏胆固醇生物合成中的关键酶,其功能是将乙酰CoA和乙酰乙酰CoA缩合为HMG-CoA,该基因与胆固醇的合成密切相关。
       本试验选取0~14日龄雏鹅,无菌条件下进行肝脏灌流,用改进后的半原位灌注法获取完整肝脏组织,用于原代肝细胞的培养。同时,并用不同浓度脂肪酸、胰岛素及葡萄糖处理鹅肝细胞,并检测鹅肝细胞中脂肪酸沉积量及HMGCS1基因的表达,探讨脂肪酸、胰岛素及葡萄糖对鹅肝细胞脂肪沉积的影响。
       通过改进后的半原位灌注法成功获得了活性良好的原代肝细胞。利用形态学鉴定分离培养的细胞为肝实质细胞。通过对细胞不同时间段的观察发现分离培养的原代肝细胞在24孔板中生长良好。不同种类、不同浓度的脂肪酸处理鹅肝细胞结果发现,花生四烯酸在50 μM和100 μM浓度下与对照组相比吸光度极显著上升,随着浓度的增加,HMGCS1基因的表达量也显著上升(P<0.05);DHA的三个处理浓度下与对照组相比都有显著增加,HMGCS1基因的表达在在100 μM时达到顶峰,与对照组形成显著差异(P<0.05);亚油酸则呈先升高后下降的趋势,其中50 μM浓度下吸光度极显著升高,HMGCS1基因的表达也显著高于对照组(P<0.05);硬脂酸在50 μM浓度下与对照组相比吸光度有显著增高;HMGCS1基因的表达无显著差异(P>0.05);油酸在不同浓度处理下都吸光度、HMGCS1基因的表达差异都不显著(P>0.05)。三个浓度葡萄糖处理下的细胞尼罗红吸光度均极显著降低(P<0.01)。胰岛素浓度从高到低其吸光度有先上升后下降的趋势,与对照组相比当胰岛素浓度低于1×10-7 M时,细胞吸光度显著上升(P<0.05),而当胰岛素浓度再增加时细胞吸光度极显著降低(P<0.01)。将不同浓度的葡萄糖和胰岛素处理细胞,发现HMGCS1基因的表达没有差异(P>0.05)。本试验表明一定浓度下的不饱和脂肪酸和胰岛素有利于脂肪的合成,而葡萄糖和高浓度的不饱和脂肪酸和胰岛素则会降低肝细胞中的脂肪含量。但葡萄糖以及胰岛素对细胞的处理并没有引起HMGCS1基因的表达发生变化,这可以消除葡萄糖和胰岛素在脂肪酸处理时对该基因表达的影响。

 

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