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鸭脂肪代谢相关miRNA-mRNA的分析与验证
来源: |  日期:2015-12-2 |  阅读:2801
       鸭脂肪性状是鸭养殖中的一项重要指标,它不仅关系到鸭产品的口感风味,还关系到饲料转化率和消费者的脂肪摄入,进而影响到饲养成本和消费者健康,故对鸭脂肪代谢的研究具有重要的意义。而相关的研究中,关于鸭脂肪代谢的调控网络,尤其是miRNA等基础调控层面的研究报道相对较少。
       本研究从miRNA层面上对鸭脂肪代谢的调控网络进行了基础研究。首先,在实验组饲料中添加油脂,对2组10周龄的樱桃谷鸭进行正常饲喂。经过2周的饲养,收集实验组和对照组(各5只)的肝组织,进行粗脂肪含量以及各脂肪酸比例进行测定,分析差异显著性。并对肝组织中的miRNA进行高通量测序,分析找出所有差异表达的miRNA,再进行脂肪代谢相关的靶基因预测,最后结合qRT-PCR和双荧光素酶报告系统进行miRNA-mRNA关系的验证,找出鸭脂肪代谢调控相关的miRNA-mRNA,为今后的鸭脂肪代谢提供重要的研究基础和研究对象。
       本试验中,经过不同脂肪含量的饲料饲喂,试验组的肝脏中脂肪含量(3.153 ± 0.049% b)显著高于对照组(2.875 ± 0.035% a),说明两组之间脂肪代谢程度存在显著差异。测序结果中,找出脂肪代谢相关miRNA共21条,其中10为新发现的miRNA,对这21条miRNA进行靶基因测序,从中找出脂肪代谢通路相关的靶基因73个,共组成miRNA-mRNA316对。挑选其中感兴趣的miRNA-mRNA两对,gga-miR-144-ELOVL6和N(新预测)-miR-16020-FASN进行结果验证。首先qRT-PCR结果显示两条miRNA在实验组肝组织中的表达量显著低于实验组,而两个靶基因(FASN和ELOVL6)的表达量则显著高于对照组,这个测序结果一致。另外,双荧光素酶报告系统验证结果显示,gga-miR-144-ELOVL6和N-miR-16020-FASN两对均存在相应的靶向调控关系,说明本实验所预测的miRNA-mRNA关系具有一定程度的可靠性。本结果为研究鸭脂肪代谢调控研究提供新思路和研究对象,对该研究的深入挖掘具有重要的意义。
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